科研干货丨基质效应对LC-MS/MS定量的影响

 

基质物质?

基质效应!

 

基质效应是目前液质联用技术(LC-MS/MS)运用过程中遇到的难题之一,生物样品萃取物中干扰成分的存在对分析物的质谱信号有重要影响,离子抑制与离子增强是基质效应的两种表现形式,分别表现为基质成分对分析物信号的降低与增强作用,其中离子抑制较为常见。

生物样品中,产生离子抑制的成分来源很多,以血浆为例,包括内源性物质,如:生物样品萃取物中存在的无机电解质、盐类、酚类、色素、糖、氨基酸、尿素、磷脂、多肽及与分析物化学结构相似的类似物或代谢物等;外源性物质,如:样品处理过程中引入的塑胶及聚合物残余物、邻苯二甲酸盐及洗涤剂降解物、离子对试剂、校正液及缓冲液及固相萃取柱的材料释放的物质等。

 

 

 
 

基质成分干扰的存在对LC-MS/MS定量分析产生的影响主要为:①影响质谱离子化效率;②改变质谱中离子化高压电场的分布。生物样品中的内源性物质如蛋白、脂肪、多糖、多肽可增加流动相粘度,改变喷雾溶液的表面张力,使得喷雾分散差,形成的液粒大,进而降低质谱离子化效率。生物样品中的磷脂和电解质具备吸附电荷或高导电性能,严重影响离子源的高压电场分布。上述原因可导致LC-MS/MS定量方法的灵敏度降低。

 

 

目前LC-MS/MS定量常用方法是内标法,以分析物与内标响应值之比作为LC-MS/MS定量的基础。而质谱内环境在高电场影响下持续变化,基质成分对分析物与内标的干扰作用难以达到一致,因此基质效应还影响LC-MS/MS定量方法的准确度。

综上所述,基质效应可影响LC-MS/MS定量的灵敏度与准确度,而去除基质成分干扰物可作为降低基质效应影响的重要手段。

 

 
 

“新一代快速血药萃取利器”——eETray 

广东联捷自主研发——eETray ,易萃血样萃取柱(盒),通过与蛋白沉淀法对比去蛋白效果实验、去磷脂实验以及基质效应情况,证明能有效去除基质物质,降低基质效应效果显著。

 

去蛋白效果对比实验

采用同体积未经前处理的血浆经氮吹后得到的残渣重量与经不同前处理方法处理后的残渣重量之差,作为评定去除蛋白的直观手段。

 

结果显示,经eETray萃取法处理后的残渣重量仅为蛋白沉淀法处理后残留量的63.5±10.3%,证明eETray萃取法去除蛋白的效果优于蛋白沉淀法。

 

 

去磷脂效果对比实验

通过测定磷脂主要成分,包括L-α-溶血磷酰胆碱和L-α-磷脂酰胆碱,对比经eETray萃取法与蛋白沉淀法处理后的血浆样品中磷脂成分的残留量,考察eETray萃取法和蛋白沉淀法的去磷脂效果。

 

 

结果表明,eETray萃取法能有效去除磷脂主要成分中的L-α-溶血磷酰胆碱。

 

 

基质效应对比实验

基质效应(ME)是直接反映基质干扰物对待测物信号干扰的数值指标,根据相关规定,当85%115%时,表示基质成分对待测物具有离子增强作用,当ME<85%时,表示基质对待测物具有离子抑制作用。

对市面上常见的7种药物,通过空白血浆外加标液的方式,分别采用蛋白沉淀法以及eETray萃取法进行样品前处理,考察经前处理后的基质效应,得出以下数据:

 

 

结果显示,eETray萃取法能有效去除干扰药物电离效应的基质成分。

 

 

通过以上三种对于去基质物质的试验方法,结果表明eETray的去基质能力强,降低基质效应能力优于蛋白沉淀法。

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